初級檢驗技師輔導：酶聯(lián)免疫吸附試驗

　　初級檢驗技師輔導：酶聯(lián)免疫吸附試驗

　　酶聯(lián)免疫吸附試驗

　　(1)基本原理

　　酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)屬固相酶免疫測定方法，了解其原理：根據(jù)顏色深淺進行定性或定量分析。

　　(2)方法類型及反應原理

　　ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體;②酶標記的抗原或抗體;③酶作用的底物。

　?、匐p抗體夾心法：是檢測抗原最常用的方法。也可用雙抗原夾心法測定標本中的抗體。

　?、陔p位點一步法：這種方法不但簡化了操作，縮短了反應時間，如應用高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性也顯著提高。

　?、坶g接法測抗體：是檢測抗體最常用的方法，其原理是利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體。本法只要更換不同的固相抗原，可以用一種酶標抗抗體檢測各種與抗原相應的抗體。

　?、芨偁幏ǎ焊偁幏捎糜跍y定抗原，也可用于測定抗體。

　?、莶东@法測IgM抗體：血清中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時存在，后者會干擾IgM抗體的測定。因此測定IgM抗體多用捕獲法，先將所有血清IgM(包括特異性IgM和非特異性IgM)固定在固相上，在去除IgG后再測定特異性IgM。

　?、迲糜H和素和生物素的ELISA：親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。生物素又稱維生素H，存在于蛋黃中。親和素與生物素結合，雖不屬免疫反應，但特異性強，親和力大，兩者一經(jīng)結合極為穩(wěn)定。

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