2012檢驗(yàn)技士免疫檢驗(yàn)輔導(dǎo):免疫組化(LP法)操作步驟
1.切片常規(guī)脫蠟至水。如需抗原修復(fù),可在此步后進(jìn)行
2.緩沖液洗3min/2次。
3.為了降低內(nèi)源性過(guò)氧化物酶造成的非特異性背景染色,將切片放在Hydrogen Peroxide Block中孵育10-15分鐘。
4.緩沖液洗5min/2次。
5.滴加UltraVBlock,在室溫下孵育5分鐘以封閉非特異性的背景染色。
(注:孵育不要超過(guò)10分鐘,否則會(huì)導(dǎo)致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有5-10%正常羊血清,這一步可以省略。)
6.緩沖液洗5min/2次。
7.滴加一抗工作液37℃孵育1-2小時(shí)。(具體孵育時(shí)間和溫度由試驗(yàn)者最終決定)
8.緩沖液洗5min/2次。
9.滴加Primary Antibody Enhancer(增強(qiáng)子),在室溫下孵育20分鐘。
10.緩沖液洗5min/2次。
11.滴加HRPPolymer(酶標(biāo)二抗),在室溫下孵育30分鐘。
(注:HRPPolymer對(duì)光敏感,應(yīng)避免不必要的光暴露并儲(chǔ)存在不透明的小瓶中。)
12.緩沖液洗5min/2次。
13.向1mlDAB Plus Substrate中滴加1-2滴DAB Plus Chromogen,混勻后滴加到切片上,孵育3-15分鐘。(具體時(shí)間由染色深淺決定。) 14.自來(lái)水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明,封片。
衛(wèi)生職稱各專(zhuān)業(yè)招生簡(jiǎn)章
2012環(huán)球網(wǎng)校醫(yī)學(xué)考試網(wǎng)推出“免費(fèi)試學(xué)15天”
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