2015年自考生物制藥學復習資料:支原體污染的檢測方法
更新時間：2014-11-13 10:56:42
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細胞培養(yǎng)過程中，支原體污染的檢測方法包括
(1)培養(yǎng)法：將疑有支原體污染的培養(yǎng)物0.5mL經(jīng)-20℃凍融后接種到支原體瓊脂平皿上，于37℃無氧條件下培養(yǎng)7～4d，觀察有無支原體菌落形成;
(2)熒光染色法：熒光染料用Hoechst33258，支原體內(nèi)含有DNA，通過支原體DNA結(jié)合熒光染料后，在熒光顯微鏡下能見到發(fā)綠色熒光的小亮點。被支原體污染的細胞不僅在細胞核而且在細胞核外及細胞膜上均顯示熒光;
(3)聚合酶鏈反應(PCR)方法：是一種快速敏感的支原體檢測方法。根據(jù)常規(guī)PCR反應原理和實驗步驟即可完成對培養(yǎng)物中支原體的快速檢測，具有很高的靈敏度。可快速檢測細胞培養(yǎng)物和生物制品、牛血清等生物材料中的支原體污染，比常規(guī)培養(yǎng)法和DNA間接熒光染色法快5～10d。
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