2013檢驗主管技師考試臨床化學：血清總蛋白質的測定

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　　新鮮全血采取后經自然凝固，析出血清，除去含量約為2-4μg/L的纖維蛋白原，剩下的即為血清蛋白質。健康成人在活動狀態(tài)采血，其含量為 63-83g/L，平臥休息時為60-78g/L。血漿總蛋白質含量的變化不外兩大原因;一是血容量的改變(濃縮或稀釋);二是個別蛋白質組分的明顯增加或減少。血濃縮時的高血漿蛋白血癥，各個組分成比例的增加(病史中有失水史)。血稀釋時的低血漿蛋白血癥亦是相對的，各組分蛋白質仍保持正常的比例。

　　由于個別蛋白質的變化所致的低蛋白血癥，最多見的原因是低血漿白蛋白。輕度的高蛋白血癥可由于慢性感染性疾病引起的多克隆，彌散性的γ球蛋白增多癥是由于多發(fā)性骨髓瘤或異常蛋白血癥時單克隆免疫球蛋白增多。

　　應當指出，在進行化學定量測定血漿蛋白質時，我們作了如下假定：①所有血漿蛋白是純的多肽鏈(糖脂類和金屬有機物等均不計在內)，其含氮量平均為16%;②幾百種血漿蛋白其理化性質雖不同，但與化學試劑作用產生的反應(如呈色、沉淀)是一致的。顯然，這是過于理想化了的，事實上前一種情況是不存在的，后一種情況在不同蛋白質之間也有很大的差別，因此采用任何一種化學方法作血漿蛋白質的測定，嚴格來講都是從實用出發(fā)的，是相對的定量。

　　至今，凱氏定氮法仍然是建立各個具體方法時采用的參考標準方法。

　　雙縮脲比色法是目前首先推薦的蛋白質定量方法。方法操作簡便，雖然雙縮脲試劑有大同不異。其中酒石酸鉀納可以穩(wěn)定在堿性溶液中的銅離子，含有碘化物作為抗氧化劑。雙縮脲反應生成的復合物其吸收峰為540nm?？刹捎霉J的標準牛血清白蛋白作為標準品，經精確稱量，必要時用凱氏定氮法標定。各地質控中心提供的混合標準血清可作為第二參考，血清用量100μl，在10-120g/L濃度范圍內呈良好線性關系，批內CV值<2%，其它常用的方法還有：

　　1.基于蛋白分子中含有酪氨酸和色氨酸而使用的酚試劑比色法 由于各種蛋白質分子中上述兩種氨基酸的組成比例不同，特別是白蛋白含色氨酸為0.2%，而γ-球蛋白中含量達2%-3%，導致較大的差異。Lowry的改良法在酚試劑中加入Cu2+，集中原法和雙縮脲反應兩者的作用，使呈色靈敏度提高。其中75%的呈色依賴于Cu2+。反應產物最佳吸收峰在 650-750nm，方法靈敏度為雙縮脲方法的100倍左右。有利于檢測較微量的蛋白質。但試劑反應仍易受多種化合物的干擾。

　　2.采用280nm和215/225紫外吸收值，計算蛋白質含量　280nm 是由于蛋白質分子中存在芳香族氨基酸所致。方法的特異性和準確性受蛋白分子中該種氨基酸的含量比例影響甚大。尿酸和肝紅素在280nm附近有干擾。紫外區(qū) 200-225nm是肽健的強吸收峰。在此區(qū)域其吸收值為280nm的10-30倍，將血清稀釋1000-2000倍可以消除干擾物質的影響。

　　3.采用沉淀反應進行散射比濁法　用磺柳酸、三氯醋酸等配方，此方法甚為簡便，不需特殊儀器，技術關鍵在于：①選擇最佳試劑濃度及溫度;②混勻技術;③選用的標準;④待測標本中的蛋白濃度。

　　4.染料結合法 蛋白質可與某些染料特異結合，如氨基黑(amino black)與考馬亮藍(comassive brilliant blue )。這一性質除了可以用于電泳后的蛋白質區(qū)帶染色，亦可用于總蛋白質的定量。缺點是多種蛋白質與染料的結合力不一致?？捡R亮藍在與蛋白質結合后的吸收峰從 465nm移向595nm，這一性質可用分光光度法來定量檢測。

　　關于用化學方法測定白蛋白，現多采用特異性的染料(BCG或BCP)結合法。

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